Auteur Sujet: Méthodologie  (Lu 6752 fois)

Hors ligne Emma01

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Méthodologie
« le: 28 Novembre 2010 à 19:37:42 »
Bonjour à tous ! ^^

Mon cours n'est pas très bien organisé, et en cherchant sur internet je me perds quelques fois dans certains détails inutiles.
C'est pour cela que je voudrais savoir (grâce à vous :p) de manière claire, quelles anomalies permettent de détecter chacune de ces méthodes : le Southern blot, le Norther, Western, la PCR et RT-PCR, le séquençage de sanger. Vous pouvez m'aider s'il vous plait ?

De plus, j'ai quelques points dont j'aimerais que vous m'aidiez à éclaircir (s'il vous plait) :

1- on me dit que le Nothern nous permet de trouver un ou plusieurs ARN du même gène. C'est-à-dire, quel est l'intérêt ?

2- On me dit aussi la chose suivante : Northern et Western donnent des infos sur les conditions de l'expression des gènes : qu'est ce que cela veut dire ?

3- Quel est l'intérêt de la PCR ?
On va répliquer un fragment spécifique d'ADN un grand nombre de fois. On a donc des copies du même fragment que l'on veut étudier c'est ça ? Quelles informations peut-on en tirer, je ne comprends pas bien.

4- Comment peut-il y avoir contamination avec la méthode de PCR je ne comprends pas.

5- Enfin (il était temps je sais), quel est l'intérêt du séquençage de sanger ?

Je sais que je vous en demande beaucoup ! Je suis vraiment désolée mais c'est important.

Un grand merci d'avance (si vous arrivez à répondre à toutes ces questions je vous en serai très reconnaissante :p)
« Modifié: 28 Novembre 2010 à 19:39:13 par Emma01 »

Hors ligne Toguy

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Re : Méthodologie
« Réponse #1 le: 28 Novembre 2010 à 21:57:26 »
Je te répond en fonction du cours de Mr Frébourg (cours de la fac de Rouen donc)

Bon ce n'est pas exhaustif
Southern
-Detecte présence ou non d'un gène
-Taille : duplication / délétion
-RFLP ou VNTR

Northern
-Détecte expression d'un gène

Western
-identifie prot traduite

PCR
-permet de repérer les microsatellite

Séquençage
-permet de repérer SNP

1) Le northern permert d'aprécier l'expression d'un gène au niveau du transcriptome, le gène transcrit un ARN, on verra une bande après révélation correspondant à l'ARN.
S'il n'y pas de tache, il y a un problème, le gène n'a pas transcrit l'ARN (pour faire simple)

2) Le Western lui évaluer l'expression du gène mais au niveau du protéome, c'est à dire l'ARNm a été traduit en protéine.

3) La PCR c'est juste une méthode d'amplification de l'ADN, c'est un préalable à toutes les méthodes de biologie moléculaire. Par exemple pour séquencer de l'ADN, une seule molécule d'ADN ne suffit pas il faut l'amplifier.
Cependant la PCR a quelques applications pratiques
Comme repérer des microsatélites
Détecter la présence de bactéries ou virus (hors programme)

4) La PCR consiste à amplifier une molécule d'ADN particulière, par exemple on veut vérifier si Mr Dupont est porteur d'un microsatélite.
Cependant si un manipulateur ne prend pas de mesure d'asepsie, il peut contaminer l'échantillon, en y mettant son propre ADN, ce qui va fausser les résultats...

5) Le séquençage permet d'avoir la séquence, base par base de l'ADN d'une personne. Généralement on ne séquence pas tout l'ADN du patient, mais cela permet de repérer les SNP (modification d'une base) dans une région de l'ADN.

Voilà j'espère avoir répondu à tes questions, n'hésite pas si tu as d'autres questions ^^


Hors ligne Fafa

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Re : Méthodologie
« Réponse #2 le: 30 Novembre 2010 à 22:30:36 »
Salut!
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Hors ligne Emma01

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Re : Méthodologie
« Réponse #3 le: 14 Décembre 2010 à 19:55:53 »
Merci d'avoir pris du temps pour me répondre (: